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大肠杆菌表达系统是使用很广泛的蛋白质表达系统 ,拥有遗传背景清楚 、表达水平高 、操作简单 、培养周期短等优点 ,市售的大约30%的重组蛋白产品都是由大肠杆菌系统生产而来 。
应用大肠杆菌表达系统时 ,为了得到符合科研和产业需求的重组蛋白目标产物 ,往往需要进行目标蛋白基因或菌种的突变 ,进行大量且繁琐的表达菌种和高表达蛋白突变体的筛选工作 。大肠杆菌作为宿主菌 ,表达的蛋白定位为胞内 、胞外和周质腔三种 。为获得胞内蛋白或周质腔蛋白 ,往往需要对大肠杆菌进行破碎 。虽然胞外蛋白可以借助信号肽的引导分泌到胞外 ,但蛋白的分泌效率通常不高 ,且很多时候 ,发酵中后期目标蛋白才开始运输到胞外 ,导致绝大多数蛋白仍储存在胞内 ,所以在进行蛋白制备时 ,为提高蛋白收率 ,仍需要进行细胞破碎 。因此 ,破碎细胞是高通量筛选大肠杆菌菌种时必不可少的环节 。
目前常用的破碎细胞的方法有超声 、均质机压力 、溶菌酶 、反复冷冻 、化学试剂等 ,但是这些方法不同程度存在破碎效率低 、成本高 、周期长 、细胞破碎不均一等的缺点 。尊龙凯时人生就是博z6com开发的大肠杆菌专用破菌液 ,能够高效 、简便的对大肠杆菌进行细胞破碎 ,特别适用于需要细胞破碎的高通量筛选 。
★ 产品优势
1. 原位破菌 ,使用便捷 ,筛选成本更低
原位收集菌体 ,原位破菌 ,高通量操作 。适用于各种型号培养板(如96孔板 、48孔板 、6孔板等) ,节省仪器成本 、人力成本 ,节约时间 ,方便操作 。
2. 组成成分温和
不含还原剂 、强变性剂 、离子型去污剂等烈性成分 ,对绝大多数蛋白结构和活性无影响 。
★ 使用方法
1. 按常规方法 ,在培养板(如96孔板 、48孔板 、24孔板等)中接种培养大肠杆菌 ,至蛋白表达完成 ,即可使用孔板离心机离心收菌 ,弃去上清 ,尽量去除干净;
2. 只需将孔板中收集的菌体按照孔板体积的五分之一左右加入破菌液 ,简单混匀 ,置于-20°C以下冰箱 ,待完全冷冻结实 。需要破菌时取出室温自然解冻充分 ,然后按常规方法高速冷冻离心 ,收取破菌上清和菌体沉淀 。
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