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一 、产品简介
超级核酸酶CRGase是一种来源于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens ，也称灵杆菌)的非特异性核酸内切酶 ，也称全能核酸酶或广谱核酸酶 。该核酸酶可在非常宽泛的条件下降解单链 、双链 、线状 、环状 、天然或变性等各种形式的DNA或RNA ，产生长度为3至5个碱基的5'-单磷酸寡核苷酸 。
本产品用途广泛 ，可用于在重组蛋白 、病毒疫苗 、抗体药物等生物制品生产过程中去除核酸 ，或用于降低细胞 、组织 、微生物等蛋白裂解液样品的粘度等（可以用于化学破菌而省去超声仪或高压均质机 ，或者结合化学破菌大幅度减少超声仪或高压均质机的工作负荷） 。
本产品采用我公司自主研发的技术平台表达 、纯化和制备 ，分子量约为52.3kDa 。本产品活性部分与Serratia marcescens中的天然核酸内切酶氨基酸序列完全一致 。
二 、产品性质
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来源 |
E. coli |
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分子量 |
52.3 kDa |
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纯度 |
不小于 95% （ SDS-PAGE ） |
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等电点 |
6.19 |
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酶活 |
不小于 200 U/μL |
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最适酶活 pH |
8.0-9.2 （工作范围 pH 6.0-10.0 ） |
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最适酶活温度 |
37℃ （工作范围 0℃-42℃ ） |
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最适辅助因子 |
2mM Mg2+ （工作范围 1-10 mM ） |
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蛋白酶活性残留 |
未检出 |
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保存缓冲液 |
10mM Tris (pH8.0), 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% 甘油 |
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活性单位定义 |
在 37℃ ， pH 8.0 反应条件下 ，在 30 min 内完全消化 37 μg DNA 成为寡核苷酸的酶量（相当于使 △A260 吸收值变化 1.0 ）定义为一个活性单（ U ） 。 |
三 、产品用途
1）有效去除各种重组蛋白制备过程中的核酸残留；
2）有效去除病毒疫苗和各种重组病毒中的核酸 ，以符合国家食药监局相关指南中关于核酸污染的要求；
3）有效降低细胞裂解液由于大量核酸存在而导致的粘度过大 ，以使裂解液易于后续操作；
4）有效降低大肠杆菌或其它工程菌裂解液粘度 ，大幅改善蛋白制备过程中菌体裂解液难过滤 、难离心的问题 ，节约设备和人力成本；
5）在某些情况下 ，充分去除核酸可以提高包涵体蛋白的复性率；
6）在实时定量PCR测定重组病毒滴度时 ，用于去除病毒包装细胞的核酸和包装质粒污染；
7）有效防止细胞成团 ，在细胞培养液中或某些细胞冻存液中加入适量超级核酸酶 ，可以防止细胞成团 ，以利于后续细胞分析和检测 。超级核酸酶没有蛋白酶的活性残留 ，本身也不会对健康细胞造成伤害 ，因此是防止细胞成团的理想选择 。
8）在二维凝胶电泳(2-DE)的过程中 ，加入核酸酶可以提高蛋白质的分离效率和双向电泳的分辨率 。
四 、产品效果
五 、运输和保存方法
低温运输（冰袋或干冰） ，-20℃保存 ，有效期3年 。4℃保存一个月 ，酶活性没有明显变化 。
六 、常见化学试剂兼容条件
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化学试剂 |
最佳条件 |
有效条件 |
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DTT |
0-100 mM |
可以大于 100 mM |
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2-Mercaptoethanol |
0-100mM |
可以大于 100mM |
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Triton X-100 |
-- |
小于 0.4% |
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Urea |
-- |
小于 5M |
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SDS |
-- |
小于 0.05% |
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磷酸根离子 |
0-10 mM |
0-100 mM |
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单价阳离子（如 Na + , K+ , NH4 + ） |
0-20 mM |
0-150 mM |
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(NH4)2SO4 |
-- |
小于 100mM |
七 、使用方法示例（去除细胞裂解上清中的核酸）
1 、样本准备
大肠杆菌 ：离心收集菌体 ，用PBS或其它缓冲液清洗1次 ，8,000 rpm离心5 min ，收集菌体沉淀 。
贴壁细胞 ：去除培养基 ，用PBS清洗细胞 ，去除上清 。
悬浮细胞 ：离心收集细胞 ，用PBS清洗细胞 ，6,000 rpm离心10 min ，收集细胞沉淀 。
2 、样品处理
将收集到的菌体或细胞沉淀按照质量（g）与体积（mL）比1 ：(10~20) 的比例进行裂解处理 ，可以在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞 。
3 、酶的添加
按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加超级核酸酶 ，也可以先进行预实验自行选择添加的酶量 ，在一定范围内增加酶量 ，消化所需时间相应减少 。
4 、上清获取
以12,000 rpm的转速高速离心10-30min ，去除沉淀 ，即获得菌体或细胞裂解液上清 ，再进行后续相关实验 。
八 、注意事项
1）若溶液为高盐溶液 ，偏酸性或者偏碱性 ，含有较高浓度的去垢剂 、变性剂 ，应适当增加酶的用量或延长孵育时间 。尽量按照上表“常见化学试剂兼容条件”表中的浓度范围调整待处理样品相关试剂的浓度 ，以使酶活性处于最大 。
2）不建议-80ºC保存本产品 ，也不建议反复冻融 ，有可能会降低产品的酶活性 ，可以适当分装保存于-20ºC 。
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